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- Chemokine Receptor Expression on Normal Blood CD56(+) NK-Cells Elucidates Cell Partners That Comigrate during the Innate and Adaptive Immune Responses and Identifies a Transitional NK-Cell PopulationPublication . Lima, M.; Leander, M.; Santos, M.; Santos, A.; Lau, C.; Queirós, M.; Gonçalves, M.; Fonseca, S.; Moura, J.; Teixeira, M.; Orfao, A.Studies of chemokine receptors (CKR) in natural killer- (NK-) cells have already been published, but only a few gave detailed information on its differential expression on blood NK-cell subsets. We report on the expression of the inflammatory and homeostatic CKR on normal blood CD56(+low) CD16(+) and CD56(+high) CD16(-/+low) NK-cells. Conventional CD56(+low) and CD56(+high) NK-cells present in the normal PB do express CKR for inflammatory cytokines, although with different patterns CD56(+low) NK-cells are mainly CXCR1/CXCR2(+) and CXCR3/CCR5(-/+), whereas mostly CD56(+high) NK-cells are CXCR1/CXCR2(-) and CXCR3/CCR5(+). Both NK-cell subsets have variable CXCR4 expression and are CCR4(-) and CCR6(-). The CKR repertoire of the CD56(+low) NK-cells approaches to that of neutrophils, whereas the CKR repertoire of the CD56(+high) NK-cells mimics that of Th1(+) T cells, suggesting that these cells are prepared to migrate into inflamed tissues at different phases of the immune response. In addition, we describe a subpopulation of NK-cells with intermediate levels of CD56 expression, which we named CD56(+int) NK-cells. These NK-cells are CXCR3/CCR5(+), they have intermediate levels of expression of CD16, CD62L, CD94, and CD122, and they are CD57(-) and CD158a(-). In view of their phenotypic features, we hypothesize that they correspond to a transitional stage, between the well-known CD56(+high) and CD56(+low) NK-cells populations.
- CONTRIBUTO DA CITOMETRIA DE FLUXO PARA O ESTUDO DOS RETICULÓCITOSPublication . Queirós, M.; Moreira, S.; Leander, M.; Freitas, I.; Cleto, E.; Santos, F.; Henriques, M.; Teixeira, F.; Iglésias, I.; Santos, A.; Santos, M.; Gonçalves, M.; Fonseca, S.; Lau, C.; Bini-Antunes, M.; Teixeira, M.; Pinho, L.; Santos-Silva, A.; Lima, M.Os reticulócitos são eritrócitos jovens cuja presença no sangue periférico (SP) reflecte a actividade eritropoiética da medula óssea. Assim e apesar de, em determinadas situações de stress ou em diversas patologias hematológicas, se poderem encontrar no SP reticulócitos em diferentes estadios de maturação,pouco se sabe acerca deles. Este trabalho teve como objectivo caracterizar fenotipicamente as várias fases de maturação dos reticulócitos por citometria de fluxo (CF).
- CULTURAS CELULARES DE FIBROBLASTOS: FENÓTIPO E ESTUDO DO CICLO CELULAR POR CITOMETRIA DE FLUXOPublication . Fonseca, S.; Leite, F.; Sousa, R.; Santos, A. H.; Lau, C.; Teixeira, M.A.; Queirós, M.L.; Santos, M.; Gonçalves, M.; Porto, B.; Lima, M.
- Expressão dos recetores de quimiocinas, CXCR3 e CCR5, nas células natural killer do sangue de cordão umbilicalPublication . Bini-Antunes, M.; Leander, M.; Rebelo, R.; Benevides, P.; Santos, A.; Rodrigues, J.; Oliveira, L.; Queirós, M.; Santos, M.; Gonçalves, M.; Fonseca, S.; Lau, C.; Teixeira, M.; Lima, M.
- IMPORTÂNCIA DA CITOMETRIA DE FLUXO NA AVALIAÇÃO DE LESÕES CEREBRAIS SUSPEITAS DE LINFOMAPublication . Campos, F.; Bini-Antunes, M.; Santos, A.; Queirós, M.; Santos, M.; Gonçalves, M.; Fonseca, S.; Lau, C.; Teixeira, M.; Nunes, P.; Pinheiro, C.; Pires, M.; Lima, M.A citometria de fluxo (CF) tem adquirido um papel cada vez maior no diagnóstico e classificação das patologias linfoproliferativas, sendo fundamental a integração e complementaridade das informações obtidas por citometria com os resultados do estudo anatomo-patológico (EAP). Existem, porém, escassas referências na literatura que documentem a importância da CF na avaliação de lesões cerebrais suspeitas de linfoma.
- KIT D816V Positive Acute Mast Cell Leukemia Associated with Normal Karyotype Acute Myeloid LeukemiaPublication . Lopes, M.; Teixeira, M.; Casais, C.; Mesquita, V.; Seabra, P.; Cabral, R.; Palla-Garcia, J.; Lau, C.; Rodrigues, J.; Jara-Acevedo, M.; Freitas, I.; Vizcaíno, J.; Coutinho, J.; Escribano, L.; Orfao, A.; Lima, M.Introduction: Mast cell (MC) leukemia (MCL) is extremely rare. We present a case of MCL diagnosed concomitantly with acute myeloblastic leukemia (AML). Case Report: A 41-year-old woman presented with asthenia, anorexia, fever, epigastralgia, and diarrhea. She had a maculopapular skin rash, hepatosplenomegaly, retroperitoneal adenopathies, pancytopenia, 6% blast cells (BC) and 20% MC in the peripheral blood, elevated lactate dehydrogenase, cholestasis, hypoalbuminemia, hypogammaglobulinemia, and increased serum tryptase (184 μg/L). The bone marrow (BM) smears showed 24% myeloblasts, 17% promyelocytes, and 16% abnormal toluidine blue positive MC, and flow cytometry revealed 12% myeloid BC, 34% aberrant promyelocytes, a maturation blockage at the myeloblast/promyelocyte level, and 16% abnormal CD2-CD25+ MC. The BM karyotype was normal, and the KIT D816V mutation was positive in BM cells. The diagnosis of MCL associated with AML was assumed. The patient received corticosteroids, disodium cromoglycate, cladribine, idarubicin and cytosine arabinoside, high-dose cytosine arabinoside, and hematopoietic stem cell transplantation (HSCT). The outcome was favorable, with complete hematological remission two years after diagnosis and one year after HSCT. Conclusions: This case emphasizes the need of an exhaustive laboratory evaluation for the concomitant diagnosis of MCL and AML, and the therapeutic options.
- MATURAÇÃO DA LINHA ERITRÓIDE NA MEDULA ÓSSEA POR CITOMETRIA DE FLUXOPublication . Queirós, M. L.; Cerejo, L.; Leander, M.; Freitas, I.; Cleto, E.; Barbot, J.; Gonçalves, M.; Santos, M.; Santos, A.; Fonseca, S.; Lau, C.; Teixeira, M. A.; Pinho, L.; Santos-Silva, A.; Lima, M.MATURAÇÃO DA LINHA ERITRÓIDE NA MEDULA ÓSSEA POR CITOMETRIA DE FLUXO Maria Luís Queirós1,2,3, Liliana Cerejo1,4, Magdalena Leander1,3, Inês Freitas3,5, Esmeralda Cleto3,6, José Barbot3,7, Marta Gonçalves1,3, Marlene Santos1,3, Ana Helena Santos1,3,8, Sónia Fonseca1,3, Catarina Lau1,3, Maria Anjos Teixeira1,3, Luciana Pinho1,3, Alice Santos-Silva2, Margarida Lima1,3,8 1Serviço Hematologia Clínica, Laboratório de Citometria, HSA/CHP; 2Serviço de Bioquímica, FF/UP; 3UMIB/ICBAS/UP; 4Mestrado em Análises Clínicas e Saude Pública, ICS/UCP; 5Serviço de Hematologia Laboratorial, HSA/CHP; 6Serviço de Pediatria, HMP/CHP e HSA/CHP; 7Unidade de Hematologia Pediátrica, HMP/CHP; 8Consórcio Euroflow. Hospital de Santo António, Centro Hospitalar do Porto (HSA/CHP), Porto. Faculdade de Farmácia, Universidade do Porto (FF/UP), Porto. Unidade Multidisciplinar de Investigação Biomédica, Instituto de Ciências Biomédicas Abel Salazar, Universidade do Porto (UMIB/ICBAS/UP), Porto. Instituto de Ciências da Saúde, Universidade Católica Portuguesa (ICS/UP), Porto. Hospital Maria Pia, Centro Hospitalar do Porto (HSA/CHP), Porto. Consórcio Euroflow. Introdução No processo de maturação dos eritrócitos do sangue (RBC), as células eritróides (ERI) sofrem uma série de mudanças dentro da medula óssea (MO), correspondentes a fases de maturação específicas que são identificadas por microscopia de luz, usando critérios morfológicos e citoquímicos. No entanto, pouco se sabe sobre as alterações imunofenotipicas que caracterizam a maturação ERI normal. Objectivo Caracterizar fenotipicamente as várias fases de maturação da linha eritróide por citometria de fluxo (CF). Material e Métodos Foram estudados por CF 15 aspirados de medula óssea de indivíduos adultos sem doença hematológica. O estudo foi efectuado utilizando o tubo de 8 cores recomendado pelo consórcio Euroflow para o estudo das ERI nas síndromes mielodisplásicos (SMD): anti-CD45 (PO) / anti-HLA-DR (PB) / anti-CD71 (APC-H7) / anti-CD33 (APC) /anti-CD117 (PC7) / anti-CD34 (PERCP Cy5.5) / anti-CD105 (PE) / anti-CD36 (FITC). As amostras foram adquiridas no citómetro NaviosTM (Becman Coulter) e analisadas com o software Infinicyt (Cytognos). Resultados Utilizando este protocolo identificamos 4 estadios imunofenotípicos, um correspondendo às ERI mais imaturas (estadio 1: CD71+CD36+CD105+CD117+CD34+; média de 0.9%; variando de 0.1 a 1.7%) e três estadios subsequentes caracterizados pela perda sequencial de CD34 (estadio 2: CD71+CD36+CD105+CD117+CD34-; 5.6%, 3.4 a 7.6%), CD117 (estadio 3: CD71+CD36+CD105+CD117-CD34-; 32.2%; 15.6 a 49.8%) e CD105 (estadio 4: CD71+CD36+CD105-CD117-CD34-; 61.3%, 41.1 a 78.2%) Discussão O tubo recomendado pelo Euroflow para o estudo das ERI nos SMD permitiu identificar 4 estadios de diferenciação dos RBC, os quais correspondem provavelmente aos quatro estadios que são identificados convencionalmente por critérios morfológicos: estadios 1 - pró-eritroblastos; estadio 2 - eritroblastos basófilos; estadio 3 - eritroblastos policromáticos; e estadio 4 - eritroblastos ortocromáticos. É necessário efectuar mais estudos para caracterizar melhor estas populações, para as comparar com as obtidas por critérios morfológicos e para as utilizar para identificar e monitorizar alterações nas ERI em várias doenças hematológicas primárias e secundárias. Apresentador: Maria Luís Queirós, Técnica Superior de Saúde, Serviço Hematologia Clínica, Laboratório de Citometria, HSA/CHP; Aluna de Doutoramento em Ciências Farmacêuticas, FF/UP.
- OS NÍVEIS DE EXPRESSÃO DE CD52 NAS CÉLULAS DE SÉZARY PODERÃO SER ÚTEIS PARA AJUDAR A PREVER A RESPOSTA DOS DOENTES COM SÍNDROME DE SÉZARY AO TRATAMENTO COM ALEMTUZUMAB?Publication . Fernandes, I.; Gonçalves, M.; Lau, C.; Teixeira, M. A.; Gonçalves, C.; Xavier, L.; Coutinho, J.; Selores, M.; Alves, R.; Lima, M.OS NÍVEIS DE EXPRESSÃO DE CD52 NAS CÉLULAS DE SÉZARY PODERÃO SER ÚTEIS PARA AJUDAR A PREVER A RESPOSTA DOS DOENTES COM SÍNDROME DE SÉZARY AO TRATAMENTO COM ALEMTUZUMAB? Iolanda Fernandes1, Marta Gonçalves2, Catarina Lau2, Maria dos Anjos Teixeira2, Cristina Gonçalves2, Luciana Xavier2, Jorge Coutinho2, Manuela Selores1, Rosário Alves1,3,4, Margarida Lima2,3,4 1Serviço de Dermatologia, 2Serviço de Hematologia Clínica, 3Consulta Multidisciplinar de Linfomas Cutâneos, HSA/CHP, 4UMIB/ICBAS/UP. Hospital de Santo António, Centro Hospitalar do Porto (HSA/CHP), Porto. Unidade Multidisciplinar de Investigação Biomédica, Instituto de Ciências Biomédicas Abel Salazar, Universidade do Porto (UMIB/ICBAS/UP), Porto. Introdução O Alemtuzumab (Altz) é um anticorpo monoclonal (AcMo) humanizado específico para o CD52, expresso em diferentes níveis na maioria dos leucócitos, incluindo linfócitos T e B, células NK, monócitos e neutrófilos. Estudos recentes mostraram que o Altz é eficaz no tratamento de neoplasias de células T periféricas, incluindo a Síndrome de Sezary (SS), uma forma rara de linfoma T cutâneo. Embora alguns doentes com SS sejam refractários ao tratamento com Altz, até ao momento não há estudos que avaliem a relação entre a expressão de CD52 nas Células de Sezary (CS) e a resposta à terapêutica. Objectivos Avaliar se a resposta ao tratamento com Altz tem relação com os níveis de expressão de CD52 nas CS. Material e métodos Estudamos a expressão de CD52 nas CS em 5 doentes com SS tratados com Altz subcutâneo em baixa dose, comparando-a com a observada nos restantes leucócitos, em particular nos linfócitos T CD4 normais. As CS foram caracterizadas por citometria de fluxo usando AcMo específicos para diferentes moléculas expressas nos linfócitos T, assim como para diferentes famílias de regiões variáveis da cadeia beta do receptor da célula T, e quantificadas no sangue antes e diferentes tempos após o início do tratamento. Resultados Quatro doentes tiveram boa resposta ao tratamento com Altz, com diminuição acentuada da eritrodermia, do prurido e das CS circulantes. Nesses casos, as CS expressavam CD52 com intensidade forte, igual ou superior à observada nos linfócitos T CD4+ normais residuais. Um dos doentes não respondeu ao tratamento, nem do ponto de vista clínico nem do ponto de vista analítico. Neste caso, as CS expressavam CD52 com intensidade muito fraca, inferior à observada nos neutrófilos, mas os níveis de expressão de CD52 nos restantes leucócitos eram normais. Conclusões Os nossos resultados confirmam os estudos prévios que indicam que o Altz é eficaz no tratamento da maioria dos doentes com SS. Para além disso, indicam que embora na maioria dos casos de SS as CS expressem CD52 com intensidade forte, em alguns casos apresentam uma deficiência selectiva desta molécula. Sugerem ainda que a resposta ao tratamento com Altz está relacionada com os níveis de expressão de CD52 nas CS e que esta deve ser avaliada em todos os doentes propostos para tratamento com este AcMo. É necessário estudar mais casos para determinar se a expressão de CD52 nas CS deve ser usada como biomarcador preditivo da resposta à terapêutica com Altz. Apresentador: Iolanda Fernandes, Médica Interna de Dermatovenerologia, Serviço de Dermatologia, HSA/CHP.
- A pilot study on the usefulness of peripheral blood flow cytometry for the diagnosis of lower risk myelodysplastic syndromes: the "MDS thermometer"Publication . Aires, A.; Teixeira, M.; Lau, C.; Moreira, C.; Spínola, A.; Mota, A.; Freitas, I.; Coutinho, J.; Lima, M.Background: Immunophenotypic analysis of the bone marrow (BM) cells has proven to be helpful in the diagnosis of Myelodysplastic Syndromes (MDS). However, the usefulness of flow cytometry (FCM) for the detection of myelodysplasia in the peripheral blood (PB) still needs to be investigated. The aim of this pilot study was to evaluate the value of FCM-based PB neutrophil and monocyte immunophenotyping for the diagnosis of lower risk MDS (LR-MDS). Methods: We evaluated by 8-color FCM the expression of multiple cell surface molecules (CD10, CD11b, CD11c, CD13, CD14, CD15, CD16, CD34, CD45, CD56, CD64 and HLA-DR) in PB neutrophils and monocytes from a series of 14 adult LR-MDS patients versus 14 normal individuals. Results: Peripheral blood neutrophils from patients with LR-MDS frequently had low forward scatter (FSC) and side scatter (SSC) values and low levels of CD11b, CD11c, CD10, CD16, CD13 and CD45 expression, in that order, as compared to normal neutrophils. In addition, patients with LR-MDS commonly display a higher fraction of CD14+CD56+ and a lower fraction of CD14+CD16+ monocytes in the PB. Based on these results, we proposed an immunophenotyping score based on which PB samples from patients with LR-MDS could be distinguished from normal PB samples with a sensitivity 93% and a specificity of 100%. In addition, we used this score to construct the MDS Thermometer, a screening tool for detection and monitoring of MDS in the PB in clinical practice. Conclusions: Peripheral blood neutrophil and monocyte immunophenotyping provide useful information for the diagnosis of LR-MDS, as a complement to cytomorphology. If validated by subsequent studies in larger series of MDS patients and extended to non-MDS patients with cytopenias, our findings may improve the diagnostic assessment and avoid invasive procedures in selected groups of MDS patients.
- QUANTIFICAÇÃO DA PROTEÍNA DE FUSÃO BCR-ABL POR CITOMETRIA DE FLUXOPublication . Almeida, A.; Gonçalves, M.; Santos, A.; Santos, M.; Fonseca, S.; Queirós, M.L.; Lau, C.; Teixeira, M.A.; Lima, M.